核酸提取細胞裂解方法之酶裂解。酶裂解是在處理樣本時在樣本中添加一種酶來消化蛋白質或細胞結構，如酵母細胞壁和絲狀。優勢：實驗室中的理想方法，過程中無需機械裂解設備；選擇性的去除細胞壁，留下細胞部分采用另一種裂解方式（通常是化學裂解），方法靈活，避免了一些由機械裂解產生的破壞。劣勢：耗時較長（酶消化可能需要1小時）而且消化酶的價格昂貴；其次，由于消化酶可能會誘導細胞產生變化變化，進而可能影響基因表達，對后續的基因表達鑒定結果產生影響導致結果不準確，因此不適合進行基因表達分析。南京正揚生物有自動化核酸提取試劑盒嗎？深圳宿主細胞殘留DNA提取操作流程
采用納米磁珠法進行核酸提取時的注意事項：1、裂解過程中，樣品的裂解要充分，讓核酸充分暴露出來。2、在樣本核酸含量高，裂解液可充分裂解的范圍內，增加樣本量可以增加提取效果。3、清洗過程要控制次數，如果清洗次數過多，會增加清洗過程中的核酸損失量。一般情況下，清洗次數在2～4次比較好。4、提取的核酸如果有蛋白及（或）鹽類殘留，可在提取過程中加入蛋白酶K降解樣品中的蛋白，減少蛋白殘留污染，同時用高濃度有機溶劑對核酸進行清洗，減少鹽殘留對酶活的抑制，從而防止雜質對下游應用產生抑制。5、在核酸提取量較低時，并不是增加磁珠用量，提取效果越好。鄭州復制型腺相關病毒核酸提取常見問題磁珠法核酸提取流程。
NaCl在核酸提取中的作用是提供一個高鹽環境，使DNA充分溶解于液相。沉淀DNA時總會加入高濃度的鹽,加鹽的目的是破壞能使蛋白質保持穩定的兩個因素,使蛋白和DNA分離并沉淀下來。而此時鹽的陽離子會與DNA結合形成DNA-陽離子鹽溶于溶液中,再用無水乙醇可以將DNA-陽離子鹽沉淀下來。提取DNA時先加0.14mol/L氯化鈉，因為在這種濃度的氯化鈉溶液中，DNA的溶解度比較低，而蛋白質的溶解度增加，這樣通過過濾能將DNA分離開，以除去蛋白質。再加入95%的酒精能使DNA沉淀，因為在這個濃度下DNA溶解度比較低。如果直接加酒精不先加氯化鈉，DNA和蛋白質都能被酒精所沉淀，就無法將DNA和蛋白質分離開。所以必須先加氯化鈉后加酒精，順序不能顛倒。
核酸提取中在細胞裂解后后往往需要進行純化處理。純化是指在細胞裂解后，核酸被選擇性的從周圍細胞成分中釋放出來，集中在水溶液或合適的緩沖溶液中以供下有使用。細胞裂解后的步驟，統稱為純化。純化方法包括：離心柱提取和純化法；苯酚/氯仿和乙醇沉淀法；納米磁珠法提取法純化法。離心柱是通過特殊硅基質吸附材料，能夠特定吸附DNA，而RNA和蛋白質順利通過，然后利用高鹽低PH結合核酸，低鹽高PH值洗脫，來分離純化核酸。苯酚/氯仿和乙醇沉淀法是通過酚/氯仿處理細胞破碎液或者組織勻漿后，在水相中主要溶解以DNA為主的核酸成分，在有機相中主要是脂類物質，蛋白質位于兩相之間。納米磁珠法是運用納米技術對超順磁性納米顆粒的表面進行改良和表面修飾后，制備成超順磁性氧化硅納米磁珠。該磁珠能在微觀界面上與核酸分子特異性地識別和高效結合。利用氧化硅納米微球的超順磁性，在Chaotropic鹽(鹽酸胍、異硫氰酸胍等)和外加磁場的作用下，從血液、動物組織、食品、病原微生物等樣本中分離出DNA和RNA。宿主細胞殘留核酸提取時，提取效果不理想的原因可能有哪些？
苯酚/氯仿和乙醇沉淀法進行核酸提取的操作步驟：1、苯酚和氯仿的接觸：裂解的樣品與苯酚/氯仿通常通過強旋渦混合。旋渦確保所有有機成分都能與苯酚/氯仿混合物充分相互作用，以達到完全溶解和去除的目的。2、離心：步驟1過后可見兩個相。含有核酸的水相位于頂部，而底部的有機相含有蛋白質、脂質和其他大分子。然后離心樣品以完全分離這兩個相。3、相分離：用移液管小心地除去水相4、乙醇沉淀：用乙醇沉淀、純化核酸。在乙醇沉淀過程中，加入鹽和乙醇以緩沖水溶液中的核酸。鹽緩沖糖磷酸骨架，乙醇改變溶液的介電常數。這使得核酸能夠從水溶液中分離出來，從而可以通過高速離心分離。5、重懸：在水或TE緩沖液中重新溶解成團的DNA或RNA。Vero細胞殘留核酸提取。深圳復制型慢病毒核酸提取常見問題
支原體檢測時，為什么要做核酸提取？深圳宿主細胞殘留DNA提取操作流程
核酸提取純化的總原則是要保證核酸一級結構的完整性，防止降解，同時要排除其他分子的污染。因為一級結構是核酸分子**基本的結構，儲存著全部的遺傳信息，是進一步研究的基礎。為了保持核酸的完整性，在提取過程中要注意防止核酸酶對核酸的降解。還要防止化學因素（酸堿等）和物理因素（高溫或機械剪切等）引起核酸變性或破壞。制備RNA要特別注意防止核酸酶的作用，因為核酸酶分布很廣，活力很高；而對DNA更重要的是防止張力剪切作用，因為DNA分子特別長，容易斷裂。對于核酸的提取純化應達到以下三點要求：①核酸樣品中不應存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子；②其他生物大分子如蛋白質、多糖和脂類分子的污染應降低到比較低程度；③排除其他核酸分子的污染，如提取DNA分子時，應去除RNA分子，反之亦然。深圳宿主細胞殘留DNA提取操作流程